藥品中少量的雜質(zhì)會(huì)大大降低藥物的療效或造成不良藥物反應(yīng)，鑒定這些雜質(zhì)，首先需要測(cè)定這些它們的元素組成。過(guò)去，我們只能借助高分辨率質(zhì)譜（諸如qTOF 、FT-ICR、或 Orbitrap） 測(cè)定準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)，然后確定這些雜質(zhì)的元素組成（分子式）。

現(xiàn)在，我們借助MassWorks處理技術(shù)，可以在低分辨率質(zhì)譜上測(cè)定準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)，然后結(jié)合MassWorks同位素峰型校正技術(shù)，可以更加準(zhǔn)確地測(cè)定目標(biāo)物的分子式，以準(zhǔn)確鑒定藥物中雜質(zhì)的組成。

在下面的案例分享中，使用低分辨率的單四極桿LC/MS結(jié)合MassWorks軟件分析雙氯芬酸的雜質(zhì)并確認(rèn)其分子式。

在Agilent 1260-6120單四極桿LC/MS上采集藥物及雜質(zhì)數(shù)據(jù)，并配備DAD檢測(cè)器用于UV檢測(cè)。圖1雙氯芬酸的UV色譜圖，4.07min的洗脫峰相對(duì)于主峰的含量為0.018%。

圖1：雙氯芬酸及雜質(zhì)的UV譜圖（254nm）

該雜質(zhì)峰的質(zhì)譜圖如圖2所示，其M+H峰的m/z=312，觀察其同位素分布，存在明顯的含兩個(gè)Cl元素的同位素特征分布。

圖2：4.07min雜質(zhì)峰的質(zhì)譜圖

在MassWorks軟件中，打開(kāi)LC/MS數(shù)據(jù)，選中主峰雙氯芬酸并提取其質(zhì)譜圖，將它的M+H離子（C14H11Cl2NO2，M=297）作為質(zhì)譜精確質(zhì)量及譜圖準(zhǔn)確度校正的標(biāo)準(zhǔn)離子，將質(zhì)譜校正結(jié)果用于雜質(zhì)峰的精確質(zhì)量數(shù)及元素組成分析。

4.07min雜質(zhì)峰的分析結(jié)果如圖3所示，其M+H離子的精確質(zhì)量的測(cè)定值為311.0095，分子式結(jié)果為C14H11NO3Cl2，質(zhì)量誤差約-1.55mDa（-4.98ppm），同位素的譜圖準(zhǔn)確度約為96.16%。因此該雜質(zhì)的分子式應(yīng)為C14H10NO3Cl2，根據(jù)分子式結(jié)果可確定它是一種已知的雜質(zhì)——羥基雙氯芬酸，其中OH基團(tuán)添加到雙氯芬酸的苯環(huán)上。

圖3：4.07min雜質(zhì)峰的分析結(jié)果

https://www.agilent.com.cn/cs/library/applications/LC-MS-201606HK-001.pdf

MassWorks軟件是由 Cerno Bioscience 公司開(kāi)發(fā)的一款革命性的MS數(shù)據(jù)定性分析軟件，能幫助我們?cè)诘头直媛实乃臉O桿GC/MS、LC/MS直接測(cè)定化合物的精確質(zhì)量，并通過(guò)獨(dú)有的譜圖準(zhǔn)確度概念確定出準(zhǔn)確的分子式。MassWorks軟件同樣適用于高分率質(zhì)譜（TOF、Orbitrap）的定性分析。

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