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這是一個(gè)使用ISOLUTE® SLE+ 柱和固定孔板萃取人全血視網(wǎng)醇（維生素A）、β-胡蘿卜素（維生素A前體）和α-生育酚（維生素E）的方法。 

 （維生素A、β-胡蘿卜素和維生素E）

維生素A和E對(duì)于哺乳動(dòng)物和生物系統(tǒng)具有抗氧化性和抗炎作用，防止細(xì)胞突變和組織損傷。由于基質(zhì)效應(yīng)LC-MS-MS分析之前需要萃取全血的維生素A和E。本方法是一種快速、高通量的樣品制備技術(shù)，可以消除全血的基質(zhì)干擾，可以在200納克/毫升或更少的目標(biāo)分析物的質(zhì)譜檢測(cè)。
固相支撐萃?。↖SOLUTE SLE +）板和柱提供了可以替代傳統(tǒng)的液-液萃?。↙LE），適合生物樣品的制備，不會(huì)形成乳狀液并顯著降低樣品制備時(shí)間。

分析物：全血視網(wǎng)醇、β-胡蘿卜素、α-生育酚
ISOLUTE SLE+ 配置
ISOLUTE® SLE+ 400µL 固定孔板,貨號(hào)820-0400-P01

ISOLUTE SLE+ 步驟
樣品預(yù)處理：用10uL異丙醇和70uLHPLC級(jí)水稀釋50uL全血，加內(nèi)標(biāo)到混合液，輕輕渦旋溶液。
上樣：裝載預(yù)處理過的樣品（約130uL）到柱板，施加正壓（PRESSURE+ 96 正壓歧管PPM-96）或低真空（VacMaster-96 樣品處理歧管121-9600）打開流量，讓樣品在重力作用5分鐘。
萃取分析物：900uL正己烷：異丙醇（v/v，90：10）加到每個(gè)孔，然后再使用900uL正己烷：異丙醇（v/v，90：10）。在收集的過程，如有需要，使用正壓或打開低真空。
后萃取處理：樣品蒸發(fā)至干（SPE Dry 96孔，貨號(hào)：SD-9600-DHS-NA），并用流動(dòng)相稀釋到200uL。
樣品制備注意：預(yù)處理血清樣本時(shí)，加入的異丙醇會(huì)加速破壞蛋白結(jié)合和增加分析物整體溶解度。
樣品通量：3.2小時(shí)或更少的時(shí)間，就可全部完成一個(gè)96孔板處理，LC-MS-MS5分鐘分析一個(gè)樣品，96孔板的整個(gè)運(yùn)行時(shí)間為480分鐘（8小時(shí)）。超過24小時(shí)樣品通量將達(dá)到每天處理288個(gè)樣品（預(yù)處理和質(zhì)譜分析）。

HPLC的條件
儀器：Agilent 1200 Liquid Handling System
色譜柱：Biotage Resolux 120 C8, 4.5µm 分析柱(150 x 3.0 mm id) (Biotage, Lund, Sweden).
流動(dòng)相：甲醇
等壓：起始100%甲醇容積流速0.8mL/min5分鐘
進(jìn)樣體積：20uL
質(zhì)譜儀器
儀器：Applied Biosystems/MDS Sciex 4000 Q-Trap三重四極桿質(zhì)譜，APCI離子源

結(jié)果
ISOLUTE SLE+ 萃取板全血維生素A、β-胡蘿卜素和維生素E，每種分析物在200ng/mL的平均回收率測(cè)定數(shù)據(jù)>95%。

（100ng/mL維生素A、β-胡蘿卜素和維生素E甲醇溶液典型提取離子譜圖）

（1ug/mL脂溶性維生素添加到全血，用400uL ISOLUTE SLE +固定板萃取終濃度200ng/mL的典型提取離子譜圖，箭頭表示在相對(duì)高濃度內(nèi)源性基質(zhì)有異構(gòu)體雜質(zhì)）

（脂溶性維生素和每個(gè)目標(biāo)分析物添加到全血，用400uL ISOLUTE SLE +固定板萃取終濃度200ng/mL的典型單獨(dú)的提取離子譜圖）

（全血200ng/mL平均回收率血維生素A（112%）、β-胡蘿卜素（125%）和維生素E（96%），回收率高是由于血液中存在內(nèi)源性維生素）

訂貨信息
貨號(hào)：820-0400-P01 ，ISOLUTE SLE+ 400 固相支撐液體萃取板，數(shù)量：1個(gè)
貨號(hào)：PPM-96 ，PRESSURE+ 96 正壓歧管96 ，數(shù)量：1個(gè)
貨號(hào)：121-9600，VacMaster-96樣品處理歧管（無真空控制），數(shù)量：1個(gè)
貨號(hào)：SD-9600-DHS-NA：SPE Dry 96 ，110/120V，美式，數(shù)量：1個(gè)
貨號(hào)：SD-9600-DHS-EU：SPE Dry 96 ，220/240V，歐式，數(shù)量：1個(gè)
貨號(hào)：R1-1521-1085，Resolux 120 分析柱 C8 150 X 2.1 mm,4.5 µm ，數(shù)量：1個(gè)

本文譯于：AN754 Extraction of Retinol, β-Carotene (Vitamin A) and α-Tocopherol (Vitamin E) from Whole Blood using ISOLUTE ® SLE+ 96-Well Plates with APCI-LC-MS-MS Analysis

視網(wǎng)醇（retinol）是維生素a的化學(xué)名稱。 維生素a是早發(fā)現(xiàn)的維生素﹐是一種脂溶性的維生素。視網(wǎng)醇只存在于動(dòng)物體內(nèi)﹐以肝臟含量為豐富﹐魚﹑蛋﹑奶﹑肉也多少含有些。

β-胡蘿卜素;β,β-Carotene;Solatene  β-胡羅卜素（遮光劑，維生素A前體），純凈的產(chǎn)品為深紅色或暗紅色、有光澤的斜方六面體或結(jié)晶狀粉末，對(duì)氧、熱及光不穩(wěn)定，是類胡蘿卜素。它是自然界中存在普遍、穩(wěn)定的天然色素，許多天然食物如螺旋藻、綠色蔬菜、甘薯、胡蘿卜、菠菜、木瓜、芒果等，皆存有β-胡蘿卜素。熔點(diǎn)183℃。溶于二硫化碳、苯、氯仿。0℃時(shí)在100ml己烷中可溶該品109mg，不溶于水、丙二醇、甘油，幾乎不溶于甲醇和乙醇，對(duì)氧、熱及光不穩(wěn)定。

α-Tocopherol,α-生育酚，Tocopherol(抗氧化劑)/維生素E，是一種常用的天然抗氧化劑?？梢员Ｗo(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激導(dǎo)致的損傷。

臨床意義：
維生素是生物的生長(zhǎng)和代謝所必需的微量有機(jī)物。分為脂溶性維生素和水溶性維生素兩類。前者包括維生素A、維生素D、維生素E、維生素K等，后者有B族維生素和維生素C。人和動(dòng)物缺乏維生素時(shí)不能正常生長(zhǎng)，并發(fā)生特異性病變，即所謂維生素缺乏癥。
維生素檢查可以了解機(jī)體中維生素的種類和總量，維生素缺乏可引起維生素缺乏癥。因此維生素檢查可以起到疾病診斷和預(yù)防的作用?！?br /> 異常結(jié)果：維生素A，視黃醇，不在0.5-2.1μmol/L范圍?！?br /> 維生素E，生育酚，不在11.6-46.4μmol/L范圍。
單神經(jīng)病與神經(jīng)叢神經(jīng)病，小兒晚發(fā)性維生素K缺乏病，維生素B2缺乏病，維生素D中毒癥，維生素B6依賴綜合征，維生素A過多病，小兒維生素B12選擇性吸收障礙綜合征，小兒維生素B6缺乏病，小兒維生素B2缺乏病，小兒維生素A缺乏病。
紫斑，嬰兒需要較大量的維生素B6，維生素E缺乏，維生素K缺乏，維生素B族缺乏，維生素B1缺乏，維生素D中毒，脂溶性維生素缺乏，小兒維生素D缺乏，維生素C缺乏。